Предпазни мерки за електрофореза на полиакриламиден гел

· ПолиакриламидГелът трябва да бъде чрез акриламиден мономер, начален материал за полимеризация, катализатор и правото на сол и буферна смес заедно.

· акриламиди BIS (N, N '- метилен двоен акриламид) е гел матрицата на мономерната форма.

· Амониев персулфат стартирайте лепилен процес на полимеризация. Формулирането на лепилото изисква 10% разтвор на амониев персулфат, приготвен във вода. По -голямата част от информацията показва необходимост от активна употреба. Въпреки това, 10% разтворът може да бъде поставен на 4 ℃ в продължение на няколко седмици без значителна загуба на активност. Направете до 10 ml и изхвърлете, когато лепилото не успее да се агрегира.

Съвет: Процентът наакриламидПри секвениране на лепило и протеиново лепило не е същото. Ако използвате предварително

· Temed (n, n, n ', n'- тетраметил етилендиамин) е катализатор, в кафява бутилка, поставена в хладилника. Добавете точно преди да излеете лепилото.

· Полиакриламид Електрофореза Използваното стъкло в електрофорезата трябва да се измива преди и след всеки път. След електрофореза измийте с мека четка и плат в гореща сапунена вода, изплакнете с дестилирана вода и застанете, за да изсъхнете.

· Влагата и прахът могат да причинят с кух полимер. Преди електрофореза, почистете стъклената чиния с почистващо средство за стъкло и я избършете с мека четка. Измийте се с дестилирана вода и изсушете старателно с хартиена избърсване. Изплакването със 70% етанол преди избърсване с хартия помага за почистване и ускоряване на сушенето. Добавете проби от акриламид последователно: BIS, вода, буферен разтвор, амониев персулфат, Temed. Разклатете добре и изсипете веднага.

Не е необходимо да се дегасирате полиакриламид преди полимеризация. (Акриламидът е поставен във вакуум за отстраняване на мехурчета, тъй като кислородът инхибира полимеризацията.)

Хоризонтални съвети за проби от лепило.

· Поставете парче черна хартия в долната кутия, черен фон, за да направите някаква дупка за проби, за да видите по -ясно.
· Буфер за изпълнение на резервоар за лепило, точно над колоида.
· Ако ръбът има светлина, включете светлините, нека светлината свети колоиди. Начертайте пробата в пипетата.
· Използване на автоматично устройство за пипетиране.
· В 10-200 mu 1 течна точка за преместване може да се използва в повечето точки на пробата. За много малки отвори за проби (по -малко от 10μ1), дългата пипетна глава, използвана за лепило за секвениране, е по -удобна.

· Пипетирането просто потопено в пробата, вдишвайки бавно движеща се течност. Пробата може да изглежда лепкава с глицерин, а бързото изпомпване може да изтегли въздушни мехурчета в главата на пипетата.

· Проби след вдишване на пипетна глава ще движат леко течната глава на ръба на тръбата или избърсване на хартиената течна глава извън капчиците. Внимавайте да не смучете пробата.

Поставете пробата в отвора на пробата

· Устройство за пипетиране За да поддържате малко налягане, направете пробите леко да се движат с преливане на течната глава.
· Пипетната глава, поставена в буфера, малко по -висока от дупките на петна, поддържат положително налягане. Върхът на пипетата може да бъде поставен в малка дупка.
· Бавно и стабилно пробите навън. Накрайникът на пипетата е поставен над отвора на пробата на точката и пробата ще потъне в отвора. Оставете пробата да потъне, за да запълни дупката на пробата, вместо да се натиска.
· След като последната капка проба с течна глава, течността ще се премести на втория крак, бавно повдигнете течността, преместете се от буфера

Как да направя вертикално вземане на проби от лепило?

· Вярочно лепило на пробата на пробата, образувани между две парчета стъкло. При много тънко лепило главата на пипетата дори не може да бъде поставена между две стъклени плочи. Гледайте глицерина! Поставете главата на пипетата върху отвора на пробата и пробата ще потъне в отвора.
· Точкова проба преди това, не забравяйте да поставите вертикалната точка на полипропилен ацил гел пробата отвор се изплаква чисто. Измийте неполимеризирания акриламид и водата, които могат да се появят в долната част на отвора на пробата. Водата може да направи дупката на пробата значително по -малка. Използвайте спринцовка от 25 мл или 50 мл и игла с 18 калибри. Изсипете буфера на електрофорезата и внимателно промийте отвора на пробата.
· Може да бъде трудно да се види дупката за проби, но в същото време останалото е лесно. Ако има излишни отвори, буферът на пробата може да бъде тестван с бромофенолно синьо.