· полиакриламидгелът трябва да се състои от акриламиден мономер, изходен материал за полимеризация, катализатор и правилната сол и буферна смес заедно.
· акриламиди BIS (N,N'-метилен двоен акриламид) е мономерна форма на гел матрица.
· амониев персулфат започва процес на адхезивна полимеризация. Рецептурата на лепилото изисква 10% разтвор на амониев персулфат, приготвен във вода. Повечето от информацията показват необходимост от активна употреба. Въпреки това, 10% разтвор може да се постави при 4 ℃ за няколко седмици без значителна загуба на активност. Допълнете до 10 ml и изхвърлете, когато лепилото не успее да се агрегира.
Съвет: Процентът наакриламидв последователността лепило и протеин лепило не е същото. Ако използвате готов акриламид: BIS разтвор, уверете се, че сте взели правилната бутилка.
· ТЕМЕД (N,N,N',N'- тетраметил етилендиамин) е катализатор, в кафява бутилка, поставена в хладилник. Добавете точно преди да налеете лепилото.
· Полиакриламидна електрофореза Използваното стъкло при електрофореза трябва да се измива преди и след всеки път. След електрофореза измийте с мека четка и кърпа в гореща сапунена вода, изплакнете с дестилирана вода и оставете да изсъхне.
· влагата и прахът могат да причинят кух полимер. Преди електрофореза почистете стъклената плоча с препарат за стъкло и я избършете с мека четка. Измийте с дестилирана вода и подсушете добре с хартиена кърпа. Изплакването със 70% етанол преди избърсване с хартия помага за почистването и ускорява сушенето. Добавете последователно проби от акриламид: BIS, вода, буферен разтвор, амониев персулфат, TEMED. Разклатете добре и изсипете веднага.
Не е необходимо да се дегазира полиакриламид преди полимеризация. (Акриламидът се поставяше във вакуум за отстраняване на мехурчета, тъй като кислородът инхибира полимеризацията.)
Накрайници за проби с хоризонтални лепилни точки.
· поставете парче черна хартия в долната кутия, черен фон, за да направите дупка за проба, за да видите по-ясно.
· резервоар за лепило, пълен с буфер, точно над колоида.
· ако ръбът има светлина, включете лампите, оставете светлината да свети колоидно. Изтеглете пробата в пипетата.
· използване на автоматично устройство за пипетиране.
· в 10-200 mu 1 течна подвижна точка може да се използва в повечето точки на пробата. За много малки дупки за проби (по-малко от 10μ1), дългата пипетна глава, използвана за секвениране на лепило, е по-удобна.
· пипетиране току що потопен в пробата, вдишване на бавно движеща се течност. Пробата може да изглежда лепкава от глицерин и бързото изпомпване може да привлече въздушни мехурчета в главата на пипетата.
· пробите след вдишване на главата за пипетиране, ще премести главата на течността леко по ръба на тръбата или хартията за избърсване ще изсмуче главата на течността извън капките. Внимавайте да не изсмучете пробата.
Поставете пробата в отвора за проба
· пипетиращо устройство за поддържане на малко налягане, накарайте пробите леко да се движат при преливане на течността.
· пипетиращата глава, поставена в буфера, малко по-високо от точковите отвори, поддържа положително налягане. Върхът на пипетата може да се постави в малък отвор.
· бавно и стабилно пробите излизат. Върхът на пипетата се поставя над точковия отвор за проба и пробата ще потъне в отвора. Оставете пробата да потъне, за да запълни отвора за пробата, вместо да натискате навътре.
· след последната капка проба с течна глава, течността ще се премести към втория крак, бавно повдигнете течността, преместете се, излезте от буфера
Как да направите вертикално вземане на проби от лепило?
· дупки за проби с вертикална точка на залепване, образувани между две парчета стъкло. При много тънко лепило главата на пипетата дори не може да бъде поставена между две стъклени плочи. Гледайте глицерина! Поставете главата на пипетата върху отвора за пробата и пробата ще потъне в отвора.
· точкова проба преди, не забравяйте да поставите вертикалната точка на дупката за проба от полипропиленов ацил гел се изплаква. Отмийте неполимеризирания акриламид и водата, които могат да се появят на дъното на отвора за пробата. Водата може да направи дупката за проба значително по-малка. Използвайте спринцовка от 25 ml или 50 ml и игла 18 калибър. Изсипете буфера за електрофореза и внимателно промийте отвора за пробата.
· може да е трудно да се види дупката за проба, но в същото време останалото е лесно. Ако има излишни дупки, буферът за пробата може да се тества с бромофенолово синьо.
Време на публикуване: 31 март 2023 г